我國(guó)柑橘主要病毒類病害及其脫毒技術(shù)研究進(jìn)展

我省柑桔次要就病目鶉體類蟲害或其緬斯控造手藝毒理

李 月等

柑桔是我省重要的糧食做物寡所周知，近5年來我省柑桔財(cái)產(chǎn)不斷連結(jié)著穩(wěn)步開展的勢(shì)頭，栽種面積與出口量均穩(wěn)步增長(zhǎng) 。但跟著柑桔栽種面積的不竭擴(kuò)大，蟲害問題也接踵而至。柑桔極易病毒傳染一種或多種病目鶉體類蟲害，引致幼苗繁衍發(fā)育受阻、出口量降低、果品品量變劣，嚴(yán)峻者以至引致幼苗失蹤 。柑桔病目鶉體類蟲害次要就由病目鶉體和類似病目鶉體引發(fā)，即由病目鶉體、類病目鶉體、螺旋體和植目鶉等病目鶉引發(fā)的 ?，F(xiàn)階段，世界上已報(bào)導(dǎo)的柑桔病目鶉體和類似病目鶉體病約有80余種，多具備易散播、危害性性大、多種病目鶉復(fù)合科散囊率高、病毒傳染后樹體末身具備特征和難以預(yù)防等特點(diǎn) 。我省較常見且對(duì)柑桔消費(fèi)危害性較大的病目鶉體類蟲害次要就有柑桔靈山病、裂缺乏癥、經(jīng)濟(jì)衰退病和西州病等。那些蟲害均可透過茶樹直達(dá)和芽條借力引種展開長(zhǎng)間隔散播，同時(shí)還能在地頭透過農(nóng)事 *** 做和鼠類等展開近間隔擴(kuò)散?，F(xiàn)階段，針對(duì)柑桔病目鶉體類蟲害尚無有效的預(yù)防辦法，只能透過嚴(yán)酷檢疫、對(duì)當(dāng)?shù)亓挤N展開緬斯處置、成立無病目鶉體茶樹繁育和推廣 *** 、對(duì)已有疑似病毒傳染茶樹展開查驗(yàn)，并對(duì)特潤(rùn)展開根除等手段展開防控。為此，本文就我省常見柑桔病目鶉體類蟲害的病目鶉性量、病癥整體表示及緬斯控造手藝的研究現(xiàn)狀展開了概述，以供參考。

1 我省柑桔次要就病目鶉體類蟲害

1.1 柑桔靈山病（Cirtus Huanglongbing，HLB） 柑桔靈山病病目鶉起初被判斷為病目鶉體 ，之后廣西柑桔靈山病研究小組透過四環(huán)素測(cè)試間接證明靈山病病目鶉不是病目鶉體而是類菌目鶉 。有研究者透過電鏡察看以及青霉素測(cè)試認(rèn)為靈山病病目鶉為類立克次氏體。近幾年，跟著分子生物學(xué)控造手藝的開展，透過對(duì)靈山病病目鶉的16S rD?NA定序比對(duì)后證明靈山病的病目鶉菌是病菌 。柑桔靈山病病目鶉菌屬韌皮部桿菌屬（Candidatus Liberobacter），按照其16S rDNA的類似性可分為亞洲種（Candidatus Liberi?bacter asiaticus）、非洲種（Candidatus Liberibacter africa?nus）和美洲種（Candidatus Liberibacter americanus） 。

我省的柑桔靈山病病目鶉菌屬亞州種，其散播體例次要就為柑桔木虱散播、借力散播以及運(yùn)輸散播。柑桔靈山病在地頭的病癥非常復(fù)雜，常見病癥為根部墨紅色firstlook、新梢平均firstlook、缺素型firstlook、貓頭鷹果等，此中典型病癥為根部墨紅色firstlook?，F(xiàn)階段，國(guó)表里查驗(yàn)柑桔靈山病的常見診斷辦法為PCR查驗(yàn)辦法 。

1.2 柑桔裂缺乏癥（Citrus Exocortis Viroid，CEVd） 柑桔裂缺乏癥是由柑桔裂皮類病目鶉體引發(fā)的，屬小麥造形根莖類病目鶉體科小麥造形類根莖病目鶉體屬，分強(qiáng)流感病毒系和弱流感病毒系 。CEVd類病目鶉體為低熔點(diǎn)RNA，不代碼卵白量，RNA以棒狀和共價(jià)閉合環(huán)狀2種分子形式配合存在于寄主體內(nèi) 。因?yàn)镃EVd具備棍棒狀二級(jí)構(gòu)造，崩解情況溫度高，110℃下連結(jié)15min后仍具備科散囊力，曲至140℃其病毒傳染力才呈非線性下降 。CEVd可病毒傳染數(shù)個(gè)柑桔種和品種，以山楂或其 *** 做纈草的柑桔易感，病癥整體表示為纈草部門樹皮縱向開裂、翹起、剝落、流膠，樹冠貶損，樹勢(shì)繁衍變?nèi)酰Ｍ高^茶樹的直達(dá)和借力展開散播?，F(xiàn)階段，我省成立了sPAGE、RT-PCR、黑點(diǎn)雜交、組織印跡雜交等一套完好的查驗(yàn) *** ，為CEVd的查驗(yàn)和監(jiān)控供給參考根據(jù)。

1.3 柑桔經(jīng)濟(jì)衰退?。–itrus Tristeza Virus，CTV） 柑桔經(jīng)濟(jì)衰退病由柑桔經(jīng)濟(jì)衰退病目鶉體引發(fā)，屬長(zhǎng)非線性病目鶉體科（Closteroviri?dae）長(zhǎng)非線性病目鶉體屬（Closterovirus），其基因由雙鏈公義RNA（ssRNA）構(gòu)成，含19296個(gè)堿基，是已知?jiǎng)游锊∧岿圀w中基因更大的病目鶉體，機(jī)殼卵白量熔點(diǎn)為25kDa 。經(jīng)濟(jì)衰退病目鶉體按照其病癥整體表示可分為以下3品種型：速衰型（quick decline，QD），引發(fā)幼苗逐步或快速的經(jīng)濟(jì)衰退或失蹤；莖陷點(diǎn)型（stem pitting，SP），引發(fā)病毒傳染幼苗莖枝木量部呈現(xiàn)凹陷點(diǎn)或溝，同時(shí)引致樹體貶損、樹勢(shì)陵夷、繁衍癡鈍等；苗黃型（seedling yellow，SY），引發(fā)幼苗根部firstlook。此中，速衰型和莖陷點(diǎn)型的株系為強(qiáng)毒系，苗黃型的株系為弱毒系，可用一些弱流感病毒系透過穿插庇護(hù)的體例預(yù)防強(qiáng)流感病毒系的危害性 。柑桔經(jīng)濟(jì)衰退病除透過借力散播外，在地頭還可透過橘蚜、棉蚜、橘聲蚜、桃蚜和繡線橘蚜散播，此中橘蚜傳毒才能最強(qiáng) 。

1.4 柑桔西州?。–itrus Tatter Leaf Virus，CTLV）柑桔西州病起初在北京檸檬和溫州蜜柑上被發(fā)現(xiàn)，次要就透過汁液展開散播，借力東西是其次要就散播路子，長(zhǎng)間隔散播則是具備特征茶樹和接穗，現(xiàn)階段尚未發(fā)現(xiàn)鼠類散播 。

CTLV屬發(fā)狀病目鶉體科（Capilloviridea）發(fā)狀病目鶉體屬（Capillo?virus）雙鏈公義RNA（ssRNA）病目鶉體，呈彎曲棒狀顆粒，大小（600～700nm）×（13～15nm），基因包羅6496個(gè)堿基，卵白量機(jī)殼的熔點(diǎn)為27kDa。此外，具備3端的poly（A）尾巴和2個(gè)開放閱讀框ORF1和ORF2，別離代碼242kDa前體卵白量和36kDa運(yùn)動(dòng)卵白量 。該病目鶉體寄主范疇廣，可以病毒傳染數(shù)個(gè)柑桔品種。我省山楂砧的寬皮柑桔類品種發(fā)病較重，常見病癥為砧穗hondayz腫大并構(gòu)成明顯的黃色環(huán)，幼苗根部碎小缺損，樹勢(shì)陵夷以至失蹤。

2 柑桔病目鶉體緬斯控造手藝

2.1 退火及化學(xué)處置緬斯 退火緬斯法是最早和最遍及的茶樹緬斯處置辦法寡所周知，其 *** 縱病目鶉體不耐高溫的特點(diǎn)，透過加熱使幼苗中的病目鶉體崩解失活，從而起到脫除病目鶉體的感化。因?yàn)椴顒e品種病目鶉體的熱抗性差別，常利用35～40℃的情況溫度范疇展開退火 。凡是退火對(duì)棒狀病目鶉體、類病菌、類菌量體等引發(fā)的蟲害有效，而對(duì)耐熱性高的類病目鶉體如裂缺乏癥病目鶉體等則沒有效果 。常見的退火辦法有開水處置法和濕熱空氣處置法。開水處置法對(duì)休眠器官或離體接穗的效果較好，凡是將待處置部門浸泡50℃擺布的開水中，必然時(shí)間后剝?nèi)∑湫菝哐空归_接種；濕熱空氣法例對(duì)繁衍活潑的莖尖效果較好，凡是是將待處置部門置于35～40℃下處置必然時(shí)間，可接納日夜瓜代、低溫瓜代或隔日高溫的形式展開 。關(guān)于差別病目鶉菌及差別的幼苗，接納適宜的處置時(shí)間與情況溫度是退火法勝利的關(guān)鍵?；瘜W(xué)處置緬斯多接納化學(xué)藥品展開處置，如嘌呤嘧啶類似物、抗生素、氨基酸等，其感化是按捺幼苗內(nèi)病目鶉體的復(fù)造，現(xiàn)階段柑桔上常見的是四環(huán)素 。有研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)靈山病病目鶉的脫除，加熱與四環(huán)素相連系展開處置，較零丁展開退火或四環(huán)素處置的效果要好 。

2.2 莖尖培育緬斯 莖尖培育緬斯法的根據(jù)是：病目鶉體透過動(dòng)物維牽制和胞間連絲展開散播，而動(dòng)物分生區(qū)尤其是莖尖繁衍點(diǎn)（約0.1～0.5mm區(qū)域）無維牽制，且細(xì)胞團(tuán)結(jié)增殖速度較病目鶉體擴(kuò)散速度快，因而莖尖繁衍點(diǎn)含毒量極低，切取那類細(xì)小的無病目鶉體組織展開培育即可獲得無病目鶉體幼苗 。一般情況，切取的莖尖越小，緬斯效果越好，但跟著剝?nèi)〉慕M織越小，其成活率會(huì)降低，因而，關(guān)于差別的幼苗需要選擇適宜的莖尖大小，以包管較好的緬斯效果和較高的成活率。

2.3 莖尖借力緬斯 因?yàn)榍o尖培育緬斯法所取莖尖組織細(xì)小，不容易培育，生根率和移栽成活率均較低，因而衍生出既能 *** 縱無毒莖尖組織借力，又能處理莖尖培育不容易生根和成活的莖尖借力緬斯法。該辦法于1972年由Mu?rashige等起首提出，1975年Navarro等 加以改良，現(xiàn)已成為國(guó)表里普遍接納的緬斯辦法。國(guó)內(nèi)研究也表白，莖尖借力能夠脫除柑桔靈山病、柑桔裂缺乏癥等病目鶉體 。影響莖尖借力成活的因素有：纈草品種、接穗拔取、莖尖大小以及借力辦法等 。因?yàn)榍o尖借力仍然存在因莖尖較小而引致成活率較低，以及對(duì)部門病目鶉體如西州病等的脫除無效，國(guó)表里學(xué)者使之與退火相連系，在莖尖借力前透過必然時(shí)間和情況溫度的退火即可獲得滿意的緬斯效果，勝利脫除出柑桔靈山病、經(jīng)濟(jì)衰退病、裂缺乏癥、西州病及鱗缺乏癥等多種病目鶉體類蟲害 。

2.4 其他緬斯辦法 除以上緬斯辦法外，緬斯路子還有珠心培育法、超低溫緬斯法、愈傷組織緬斯法等。此中，超低溫緬斯是現(xiàn)階段研究的新標(biāo)的目的，其原理是：在降低情況溫度的過程中，細(xì)胞因含水量較高，易構(gòu)成較多冰晶，使得細(xì)胞 *** 受損而亡，僅有繁衍點(diǎn)的分生組織可以存活下來，病目鶉體失去寄主細(xì)胞而被脫除。現(xiàn)階段，該控造手藝在柑桔緬斯上的應(yīng)用仍較少，丁芳 研究發(fā)現(xiàn)，接納包埋玻璃化法對(duì)柑桔莖尖展開超低溫處置，其靈山病、經(jīng)濟(jì)衰退病以及裂缺乏癥的緬斯率別離達(dá)91.6%、90.0%和88.8%。 *** 群等接納超低溫處置與莖尖借力相連系對(duì)紅江橙、沙田柚、椪柑、北京檸檬和蘿崗甜橙等5個(gè)柑桔品種展開靈山病病目鶉菌的緬斯處置，緬斯率達(dá)98.1%。

3 瞻望

成立柑桔無病目鶉體茶樹繁育 *** 是我省現(xiàn)代柑桔財(cái)產(chǎn)開展的趨向，此中借力用莖尖接穗的緬斯處置是影響無病目鶉體茶樹成活率的重要因素。莖尖借力緬斯法是柑桔茶樹中運(yùn)用最為普遍的緬斯控造手藝，但是單一的緬斯辦法往往無法脫除多種病目鶉菌，為獲得更好的緬斯效果，常接納物化處置與莖尖借力相連系的體例，如退火與莖尖借力相連系，化學(xué)藥物處置與莖尖借力相連系，以及近幾年鼓起的超低溫處置與莖尖借力相連系?？共∧岿圀w轉(zhuǎn)基因控造手藝透過基因工程控造手藝在柑桔幼苗內(nèi)轉(zhuǎn)入外源抗病目鶉體基因，促使幼苗能夠在體內(nèi)表達(dá)對(duì)響應(yīng)病目鶉菌的抗性，也為柑桔無病目鶉體茶樹的繁育供給了一條新的路子。